低血糖发作时，应同时测定血浆葡萄糖、胰岛素和c肽水平，以证实有无胰岛素和c肽不适当的分泌过多，同时还要做胰岛素释放指数，胰岛素释放指数为血浆胰岛素与同一血标本测定的血糖值之比。正常值应该是小于0.3，多数胰岛素瘤患者是大于0.4甚至1.0以上。
第三就是血浆胰岛素原和C肽的测定诊断标准就是血糖小于3.0毫摩尔每升，然后c肽大于300，胰岛素原大于200，应该考虑胰岛素瘤，第四个就是完成48到72小时饥饿试验，开始前取标本测定血糖、胰岛素和c肽之后，每六个小时一次，若血糖小于3.3毫摩尔每升的时候，应该改为每1到2个小时1次，血糖小于2.8，且患者出现低血糖症状时结束实验，第五个就是做延长五小时口服葡萄耐量试验，主要是用于鉴别r型糖尿病早期出现的餐后晚发生性低血糖，方法口服75克葡萄糖测定餐前复查后30分钟、一个小时、两个小时、三个小时、四个小时和五个小时的血糖、胰岛素和c肽，判断有无内源性的胰岛素分泌过多，有助于低血糖的诊断。
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